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浅谈酶联免疫吸附试验(ELISA)试验办法
来源于:上海联硕生物科技有限公司,浙江联硕生物科技有限公司 | 发布时间:2019/8/5 9:03:00

酶联免疫测定是将抗原抗体反响的高度特异性和酶的催化作用相结合,开展建立一种非放射性符号免疫分析办法。因为ELISA具有灵敏度高、特异性强,酶免疫试剂的性质比较稳定,操作办法简洁快速、无放射性污染以及应用范围广等很多优点,在医学根底理论研究,病毒学和生物化学查验等工作中应用十分广泛。
    该法需将纯化的抗原包被在固相载体,与必定稀释度的待侧血清反响,然后与酶符号的第二抗体(抗人IgG,IgA,IgM或抗人IgG.A.M的混合物)反响,酶可催化色原反响,在酶标测定仪必定波长下进行比色,测定吸光度。
    ELISA试剂盒的关键是要具备高质量纯化或重组的抗原,对生产厂家的抗原要求很高。因为纯化的或重组的抗原越来越多,以及商品化的高质量的ELISA试剂盒的面市,它应用于临床免疫试验室的本身抗体的检测已日渐增多,该法检测本身抗体快速、灵敏及特异性高。
一、免疫荧光法----本身抗体确诊的标准技能(IFA)
    免疫荧光测定法可分为直接和直接两类,在本身抗体检测中,以直接免疫荧光法zui为常用。因为本身抗原的方位决议了其相应的抗体的典型荧光形式,该法能经过显微镜观测地判别安排或细胞内荧光的分布。
    将已稀释血清与试验基质进行温育,令特异性抗体与试验基质中相应抗原结合,然后再与荧光符号的第二抗体温育,zui后在荧光显微镜下观察相应部位的特异性荧光形式。
    此办法灵敏、重复性好。但需要一台质量较好的荧光显微镜,且对操作人员要较高,操作杂乱耗时长,繁琐。
二、免疫印迹法(Immunoblot assay)(westerblot)
    此法是将聚丙烯酰胺凝胶电泳别离蛋白及多肽与免疫反响的高特异性相结合的一项技能。蛋白质在电泳中依分子量大小别离,然后将别离好的蛋白转印到硝酸纤维薄膜上,用酶符号的抗体或蛋白A进行染色。该法简单、快速。是现在美国、中国等国际上很多国家卫生机构的zui终承认办法。但其制备办法繁琐、本钱相对较高。

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