极高的灵敏度
在推荐浓度下使用时可以获得最强的 PCR 扩增信号。
PCR 抑制性极小
智能化的“按要求释放” DNA 结合技术使得 EvaGreen 对 PCR 的抑制远小于 SYBR TM Green I 。
和快速 PCR 兼容
对 PCR 干扰极小,从而极大的缩短了 PCR 延伸时间。
非常适合 HRM 分析
无“染料重分布”缺陷,兼容 PCR 后的高分辨率熔解曲线( HRM )分析。
兼容多重 PCR
在推荐浓度下使用时,无扩增子之间的染料迁移现象。
超强稳定性
在大部分生化条件下非常稳定,可在室温下储存并可反复冻融。
优越的兼容性
和 SYBR TM GREEN I 光谱相似,和各知名品牌的 qPCR 仪器兼容。 用 EvaGreen TM 替代 SYBR Green 1 ,毋须改变任何您目前使用的操作步骤和仪器设备。
EvaGreen TM 是一种用于实时定量 PCR ( qPCR )的 DNA 结合染料。该染料的诸多优点使它远胜于 SYBR Green I 。除了有相似的光谱特性, EvaGreen TM 有三个主要特点使它区别于 SYBR Green I 。
首先, EvaGreen TM 对 PCR 的抑制性远小于 SYBR Green I 。因此,使用 EvaGreen TM 进行的 qPCR 实验可以使用快速 PCR 步骤(图 3 )。同时, EvaGreen TM 在实验中可以使用较高的浓度,从而获得远强于 SYBR Green I 扩增信号(图 2 )。较高浓度的 EvaGreen TM 也消除了“染料重分布”的缺陷,使 EvaGreen TM 既可用于多重 PCR ,也可用于高分辨率(高清晰)熔解曲线分析( HRM )(图 4 )。该分析正被越来越多的用于 PCR 后的基因分型和异源双链分析 。由于 SYBR Green I 对 PCR 的抑制性,从而要求其使用浓度必须很低,因此 SYBR Green I 无法解决由低浓度造成的染料重分布问题,既不能用于多重 PCR 也不能用于 HRM 。同时,染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性,因为低熔点的 DNA 链可能由于这种原因而无法检测到 。
第二, EvaGreen TM 的稳定性极强。在正常的储存、操作和 PCR 过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里,也可以反复冻融。与之相反, SYBR Green I 不稳定而且降解后对 PCR 抑制性更强 。
EvaGreen TM 降低了细胞膜透性,因而比 SYBR Green 1 更加安全(图 6 )。独立实验室的测试结果显示, EvaGreen TM既没有诱变性也没有细胞毒性 5 。相反,虽然 SYBR Green I 本身诱变性很弱,但它在细胞中可能抑制了正常 DNA 的修复机制,使其有诱变增强作用 6 。考虑到 PCR 的广泛使用,其安全性应该足够重视。
BIOTIUM 公司现提供四种 EvaGreen TM 产品: EvaGreen TM 20 × (#31000) 可稀释 20 倍后用于 qPCR ; 25mM EvaGreen TM DMSO 溶液 (#31002) 作为高浓度储液,为熟悉染料的研究人员设计 qPCR 配方,开发新应用提供更大的灵活性; EvaGreen TM Msater Mix(#31003) 含有除引物以外所有扩增目的 DNA 所需成分; EvaGreen TM Basic Mix(#31001) 和 master mix 相似但不含聚合酶。
比较 EvaGreen TM Master Mix 和 Power SYBR TM Master Mix ( ABI )在 GAPDH 扩增中的效果。使用两步法通用循环条件,即 95 ℃ 下 15 秒以及 60 ℃ 下不同的退火 / 延伸时间(分别为 60 、 40 、 20 和 10 秒)。每个水平条代表 8 次实验中 Ct 值分布。数据显示,当把退火 / 延伸时间从 60 秒减为 10 秒时, EvaGreen TM Master Mix 只造成了 Ct 值约一个周期的延后,而 Power SYBR TM Master Mix 则造成了多达 5-6 个周期的延后以及重复性降低的现象。
在 Rotor Gene 6000 上使用 EvaGreen 进行高分辨率熔解曲线( HRM )分析可以明显的区分三个不同的基因型:突变型(红色)、杂合型(紫色)和野生型(蓝色)。(数据由 Corbett Research 提供)
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