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试剂(A): X-Gluc |
1支 |
2支 |
-20℃ 避光 |
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试剂(B): X-Gluc Solution |
1ml |
2×1ml |
RT |
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试剂(C): GUS Buffer |
50ml |
100ml |
4℃ 避光 |
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使用说明书 |
1份 |
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自备材料：
1、 70%乙醇
2、 去离子水
3、 小瓶或多孔板、显微镜
操作步骤(仅供参考)：
1、配制X-Gluc溶液(50x)：取1ml X-Gluc Solution完全加至1支X-Gluc中，充分溶解，即获得X-Gluc溶液(50x)。配制好的X-Gluc溶液(50x)-20℃保存，1个月有效。
2、配制X-Gluc染色液：取适量的X-Gluc溶液(50x)和GUS Buffer，按1：49比例充分混匀，配制成X-Gluc染色液，如取0.2ml X-Gluc溶液(50x)加入到9.8ml GUS Buffer中，即配成10ml GUS染色液，该染色液现用现配，短期贮存可以4℃保存3天。
3、取适量待染叶片等组织加入适量GUS染色液使其完全浸没组织。
4、37℃孵育1~24h，随着孵育时间的延长，蓝色渐渐出现，当表达量较高时GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。
5、用70%乙醇脱去样本的叶绿素，一般样本浸没于乙醇1～3h，至阴性对照呈白色。如有必要可重复该脱色步骤，以便彻底清除叶绿素；样本保存于乙醇中，可用肉眼或普通光学显微镜下观察，白色背景上的蓝色即为GUS表达位点。
注意事项：
1、 GUS染色液一般冰上配制，可以4℃避光保存3天。
2、 由于组织特异性等原因，蓝色颜色反应可能不完全一致，应注意摸索具体实验条件。
3、 拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗根就可直接染色；烟草和马铃薯这些植物的茎和叶须在染色前切成薄片(1~3mm)。
4、 当操作大的组织和样品时可以选用真空渗入法来帮助底物和酶渗入细胞，建议采购常规GUS染色液。
5、 GUS染色液(即用型)染色灵敏度较好，但有时会出现非特异性反应(即假阳性)，如非特异性反应较明显，建议采购常规GUS染色液
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