细胞增殖-毒性检测试剂盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

产品简介：

CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下，可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜（Formazan）。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

使用方法：

1、在96孔板中接种细胞悬液(100 ul /孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔约5000个细胞，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。

2、按照实验需要，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理一段适当的时间(例如: 6,12, 24或48小时)。

3、每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，以此类推。可以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。

4、在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

5、用酶标仪测定在450 nm处的吸光值，若无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。

6、如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保存在室温，24小时内吸光度不会发生变化。

注意事项：

1、使用96 孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，请注意蒸发问题。可将96 孔板外围一圈加培养基、水或PBS 保湿。同时，可以把96 孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发。

2、培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前，建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK-8 试剂后的培养时间。

3、铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀，建议铺板过程中注意时常混匀，防止因细胞沉淀造成不均匀。加入CCK-8 后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基和CCK-8 溶液充分混匀。

4、本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待测物质有氧化性或还原性，可在加CCK-8 之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

5、加入CCK-8 时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色或pH 值已变化，建议换用新鲜的培养基。

6、用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

7、本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中，请在生物安全柜内无菌操作，避免污染。

8、为了您的健康和安全，请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作。

保存方法：

    0-5℃避光保存，长期保存建议-20℃保存，但不能反复冻融。

    0-5℃条件下可保存一年。

增殖/毒性测定试剂的比较