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联硕生物:透析袋使用方法
来源于:上海联硕生物科技有限公司,浙江联硕生物科技有限公司 | 发布时间:2020/5/9 16:28:07

透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。那透析袋是怎样使用的呢?

一、透析的原理

透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”,袋(膜)外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。

透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是4℃透析,升高温度可加快透析速度。

 

二、三种不同类型的透析袋
1、普通型透析袋
1)把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段;
2)在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟;
3)用蒸馏水彻底清洗透析袋;
4)放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟;
5)冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套;
6)用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净;
2. 再生纤维素透析袋:
此类型透析袋可耐受pH范围是2.0~12.0;耐受温度是4~60;不能煮,也不需要煮,只需用纯水彻底冲洗即可。
3.纤维素透析袋:
此类型透析袋可耐受pH范围是2.0~9.0;耐受温度是4~37;不能煮,也不需要煮,只需用纯水彻底冲洗即可。

 

三、透析袋的选择
        1.确定透析袋的分子量
在选择适合截留分子量之前,首先要明确:欲保留在透析袋中的样品和想要除去的杂质的分子量。
        2.选择普通型,再生型,or纤维素透析袋
确定好分子量之后,根据实际情况,样品溶剂等,选择透析袋。
        3.正确选择扁平宽度
透析袋扁平宽度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析管透析更快;较大的透析管因扩散距离较长透析较慢。为易于使用,建议使用总长(包括闭合夹和顶部空间)为大约10-15cm的透析袋。

 

四、透析袋的使用
        下述透析程序是一个普遍的基础透析过程。在开始透析之前应考虑到许多变数。透析样品溶剂、膜的化学相容性、膜的截留分子量,透析溶剂、透析体积、温度等变量都会影响透析速率,因此,一些应用中下述透析过程可能需要适当的变化。
        a.把适量的透析液(缓冲液)加入透析装置。透析液的体积应为样品体积量的100倍。(例如:在一升透析液中透析10毫升的样品)
        b.裁剪适当长度的透析管。预留一段额外长度(约占总样品体积量的20%)作为头部空间。
        c.把透析管插入打开的透析夹,在约超出透析夹3-5毫米的位置再夹住,不要折叠透析袋。
        d.由透析管开口端将样品装入。调整一下顶部空间的长度,夹紧透析夹。
        e.把透析样品放在合适的透析缓冲液中。
        f.透析要根据具体的应用需求。通常情况下,允许过夜透析。在持续透析的过程中,至少要进行3次全部更换透析液。建议在(透析后)2-4小时,6-8小时和10-14小时(第2天早晨)更换透析液。在最后一次透析液的更换后要至少继续进行2小时的透析。

 

五、透析袋的存储

a.透析袋不能在纯水中长期储存,会长菌,用0.05%die氮化钠溶液储存
b.样品按推荐的单位长度容量加样,不可多加,样品浓度不可太大,否则容易导致膜涨破
c.样品和透析液体积比一般是1:50~500
d.对于高浓度污染物,样品可能需要较长的时间透析,透析液需要更频繁的更换。
e.透析温度主要取决于样品。温度限制主要取决于膜的类型。纤维素透析袋可以承受的温度高达37,再生纤维素透析袋可以承受的温度高达60

 

六、使用注意事项
         在适当的储存情条件下,保质期为两年。干燥的透析袋要在室温或4储存在聚乙烯袋中。一旦变湿,透析袋应浸泡在下列之一的溶液中:0.05%die氮化钠,1%jia酸钠或1%甲醛。(备注:一旦变潮湿,不要让透析袋干燥。不断干燥会造成孔隙结构不可恢复的倒塌)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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