ELISA酶联免疫吸附测定
一、实验原理：
抗原抗体特异性结合：
抗原是能诱导机体产生特异性免疫反应的物质，抗体上的可变区能识别并结合抗原上的表位，形成稳定的抗原-抗体复合物，这种结合具有高度特异性和亲和力，是ELISA检测的基础。
二、酶标记放大信号：
将检测抗体或抗原与酶进行标记，常用的酶标记物有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等。酶标记的抗体或抗原与待测样品中的抗原或抗体特异性结合，形成酶标记的免疫复合物。
三、酶催化底物显色：
实验步骤
以双抗体夹心法为例
（一）包被：
将特异性抗体稀释至适当浓度，加入微孔板中，每孔通常加100μl，用封板膜覆盖，放入4℃冰箱中孵育过夜，使抗体固定在微孔板上。
（二）封闭：
倒掉包被液，用洗涤缓冲液如PBS-Tween20洗涤微孔板3-5次，每次300μl，最后一次拍干。加入封闭缓冲液，每孔200μl，室温孵育1-2小时，以封闭非特异性结合位点，倒掉封闭液，再次用洗涤缓冲液洗涤3-5次，最后一次拍干。
三、加样：
将待测样品和标准品稀释至适当浓度，加入微孔板中，每孔100μl，设置空白对照孔，加入等体积的样品稀释液。
四、孵育：
用封板膜覆盖酶标板，放入37℃孵育箱中孵育1-2小时，使抗原-抗体反应充分进行。
五、洗涤：
倒掉反应液，用洗涤缓冲液洗涤微孔板5-7次，每次300μl，最后一次拍干，以去除未结合的物质，减少背景噪音。
六、加酶标抗体：
将酶标记的检测抗体稀释至适当浓度，加入微孔板中，每孔100μl，用封板膜覆盖，在37℃孵育箱中孵育30分钟-1小时。
七、显色：
倒掉酶标抗体溶液，用洗涤缓冲液洗涤微孔板5-7次，最后一次拍干，加入底物溶液，每孔100μl，室温避光孵育15-30分钟，直至显色反应达到预期程度。
八、读数：
加入终止液，每孔50μl，终止显色反应，使用酶标仪测量各孔的吸光度，通常在450nm波长下读取。
九、结果分析

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