一、透析袋的选择:
选择合适的截留分子量:
截留分子量(MWCO),是指留在透析袋内的生物大分子的最小分子量。透析袋常规截留分子量包括100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等种类,单位为道尔顿(D)。为了达到合理有效的分离,需分离的两种物质分子量的比率至少为25,因此,选择截留分子量的经验法则:选择截留分子量值约为要保留的大分子分子量的一半,才能获得至少90%的保留率。
二、选择扁平宽度:
透析袋扁平宽度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析管透析更快;较大的透析管因扩散距离较长透析较慢。为易于使用,建议使用总长(包括闭合夹和顶部空间)为大约10-15cm的透析袋。
三、透析袋的使用方法:
前处理方法:
1.将透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段;
2.在2%碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH=8)中将透析袋煮沸10 min;
3.将透析袋用蒸馏水进行漂洗3次;
4.将透析袋放置于1mmol/LEDTA(pH=8)中煮沸10 min;
5.透析袋冷却后存放于4度,并确保透析袋始终浸没在液体中;注意从此步起用透析袋时一定佩戴戴手套进行操作;
6.在分离实验之前要用蒸馏水将透析袋里外加以清洗。
四、使用方法:
使用透析袋进行分离时,一端用透析袋夹夹紧,由另一端灌满水,用手指稍加压,检查不漏,方可装入待透析液,通常要预留留1/3-1/2的空间,以防透析过程中,透析的小分子量较大时,袋外的水和缓冲液过量进入袋内将透析袋涨破。此外,为了加快透析速度,除多次更换透析液外,还可使用转子搅拌。小体积溶液的透析过程,可在袋内放一截两头烧圆的玻璃棒或两端封口的玻璃管,使透析袋沉入液面以下。
五、使用后处理方法:
使用后的透析袋经适当的处理后,一般会重复使用。
1.保存前可用生理盐水浸泡除去蛋白,并用蒸馏水清洗干净,洗净后置于50%乙醇中保存即可;
2.用蒸馏水彻底洗干净,可存于4度蒸馏水中,若长时间不用,可加少量NaN2,防止长菌。
3.洗净晾干的透析袋弯折时易裂口,使用时必须仔细检查,不漏才能重复使用。
*以上均来源于网络
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